(GSH)谷胱甘肽含量,小鼠酶免檢測試劑盒實驗原理:
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠谷胱甘肽(GSH)水平。用純化的小鼠谷胱甘肽(GSH)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被的微孔中依次加入小鼠谷胱甘肽(GSH),再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠谷胱甘肽(GSH)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠谷胱甘肽(GSH)含量。
操作步驟
- 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。
- 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
- 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
- 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
- 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
- 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
- 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
- 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
- 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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試劑盒性能:
1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。
2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。
檢測范圍:
0.25 ng/mL – 8 ng/mL。
靈敏度:
低檢測濃度小于0.1 ng/mL。
保存條件及有效期:
1.試劑盒保存: 2-8℃。
2.有效期: 6個月