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ELISA檢測試劑盒使用血清提取蛋白的制作辦法

更新時間:2019-06-25      瀏覽次數(shù):1921
   ELISA檢測試劑盒使用血清提取蛋白是從血清中提取的蛋白質(zhì),適用于食物工業(yè)的食物增加劑和醫(yī)藥制劑。
  通常提取蛋白質(zhì)的辦法是離心分離,除掉血漿,使二價鐵血紅素酸化,并將其掃除。但是這種辦法產(chǎn)量很低(100毫升血液僅可提取蛋白質(zhì)約10)克。
  為了進(jìn)步蛋白質(zhì)得率,選用新的辦法,即用每分鐘2500~3000轉(zhuǎn)的速度在15~30分鐘內(nèi)將血液進(jìn)行離心分離,使醋酸和氯化鈉的混合物(比值為2∶1~4∶1)酸化。在溫度90~110℃下加熱5~15分鐘。冷卻,再增加yi醚。
  制作辦法:
  取經(jīng)過安穩(wěn)的血液,作離心分離15~30分鐘,每分鐘轉(zhuǎn)速為2500~3000轉(zhuǎn)。從而獲得固形物,去除血漿,用水使固形物沉渣溶解。置血紅素于培養(yǎng)基中。為了使培養(yǎng)基酸化而使血紅素分子中的二價鐵血紅素和血球蛋白的結(jié)合體分離預(yù)先制備好醋酸和氯化鈉的混合物并將它加熱到90~110℃。混合時將固形物的溶血產(chǎn)品緩慢地增加到加熱的混合物中。從頭把溫度逐漸地升高到沸點,煮沸5~15分鐘,以便使結(jié)合體*分離,接著將混合物逐步冷卻到室溫。
  為了使二價鐵血紅素溶解并消除,進(jìn)口ELISA檢測試劑盒在混合物中按溶物產(chǎn)品比值2∶1~5∶1增加yi醚。這時提取出來的蛋白質(zhì)呈白棉絮狀。將溶液過濾,再用yi醚清洗。
  100毫升血中提取的蛋白質(zhì)產(chǎn)品相當(dāng)于14.4克。使用這種辦法,每100毫升的血液可進(jìn)步蛋白質(zhì)得率45。
  根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或赤色,我國的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的凹凸對血清并無直接影響,這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的謹(jǐn)慎規(guī)范程度,杰出的操作能下降血清的溶血。
  國產(chǎn)血清的基本上是采血后立刻離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出亮堂的蠟黃色。進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為胎牛血清凝血功用差,紅細(xì)胞簡單破裂。
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